dna建庫接頭連接原理「dna建庫是什麼意思」

高通量測序技術中一個重要環節就是文庫構建，隨着技術的不斷完善，建庫方法正朝着低成本、高通量和低起始量的方向發展。在文庫構建過程中，試劑盒的選擇是非常重要的，要根據不同的樣本情況，選擇合適的建庫試劑盒。今天小編將為大家比較Illumina 的兩種常用DNA建庫試劑盒—TruSeq和Nextera，看一下這兩種建庫方法有何異同，為後期小夥伴們建庫選擇試劑盒提供參考。以下內容全是乾貨，拿走不謝~

Illumina TruSeq DNA建庫方法

TruSeq DNA建庫方法採用超聲波方法對DNA進行隨機打斷，然後加接頭，片段篩選和PCR擴增。TruSeq DNA建庫方法比較常用，對DNA的質量要求較低，自動化程度高，基因組覆蓋度高，適合普通基因組的文庫構建，缺點是操作步驟較多，耗時較長。圖1為TruSeq DNA建庫流程圖，建庫流程如下：

DNA超聲打斷

末端修復

末端加”A”

接頭連接

片段篩選

PCR富集目的片段

圖1 TruSeq DNA建庫流程圖

Illumina Nextera DNA建庫方法

Nextera DNA建庫方法運用高活性的轉座酶，完成DNA的片段化和加接頭，具有快速、操作簡單和低建庫起始量的優點，缺點是插入序列具有偏好性，對DNA的純度和DNA濃度準確性要求較高。

Nextera建庫方法採用轉座酶隨機插入並將基因組DNA打斷成長度大小為300bp左右的片段，同時將測序所需的adaptor直接在插入打斷的同時連接到片段的兩端，縮短了建庫時間、減少了樣品的需求量，因此特別適合樣品量有限的應用，如腫瘤活檢、降解的DNA或純化的DNA。圖2為Nextera DNA建庫流程圖，建庫流程如下：

轉座酶片段打斷，連接接頭

清洗文庫DNA片段（去除轉座酶）

5個循環PCR加P5、P7接頭和index

片段篩選

圖2 Nextera DNA建庫流程圖

劃重點

看了上面的內容是不是有點紅紅火火恍恍惚惚的感覺，沒關係，小編為大家劃重點啦~TruSeq DNA建庫方法對DNA的質量要求較低，成本低，基因組覆蓋度高，自動化程度高，適合普通基因組建庫；Nextera建庫方法操作簡單，耗時短，建庫起始量低，適合樣品量有限的樣品建庫。有了小編的分享，再也不用為試劑盒的選擇發愁啦~有問題的小夥伴們可以給小編留言哦~

參考文獻：

[1]Adey A, Morrison H G, Xun X, et al. Rapid, low-input, low-bias construction of shotgun fragment libraries by high-density in vitro transposition[J]. Genome biology, 2010, 11(12): 1.

[2]Lamble S, Batty E, Attar M, et al. Improved workflows for high throughput library preparation using the transposome-based nextera system[J]. BMC biotechnology, 2013, 13(1): 1.